Innehållsförteckning
Hur fungerar elektrofores?
Gelelektroforesmetoder separerar molekyler med avseende på deras laddning, storlek och massa genom att man lägger en elektrisk spänning över gelen där man laddat provet. Genom att de olika molekylerna rör sig längs samma linje med olika hastighet kommer de med tiden att befinna sig på olika platser i gelen.
När används elektrofores?
Elektrofores kan användas både kvantitativt och kvalitativt som en analysmetod. Mer specifikt kan tekniken användas för att separera partiklar baserat på storlek, laddning, eller hur pass starkt de binder till specifika molekyler/joner.
Är DNA laddat?
DNA är negativt laddat och vandrar alltså mot den positiva änden av baljan (så här kan ett litet elektroforeskar se ut). Långa DNA-bitar kommer hindras mer av agarosen och vandra långsammare.
Vad är Agarosgel?
En agarosgel är en gelémassa bestående av bland annat sockerarten agaros, som är renad ur agar. Agaros i agarosgelen bildar ett nät. Nätkonstruktionen gör att molekyler av olika storlekar vid gelelektrofores passerar med olika hastighet.
Hur läser man av gelelektrofores?
För riktigt fina geler bör man inte ha högre spänning än 5 V/cm. Det betyder att om elektroderna är 10 cm ifrån varandra, så ska man lägga på en spänning på 50 V. På skolan har vi dock inte alltid tid att vänta så länge, och jag har kört geler med en spänning på upp till 20 V/cm med hyfsade resultat.
Vad är SDS Page?
SDS-PAGE, Sodium Dodecyl Sulphate polyakrylamid elektrofores är en viktig teknik för molekylviktsbestämning av proteiner.
Är DNA negativt?
DNA-fragmenten är stora och vid neutrala pH är fosfatgrupperna i DNA-molekylen negativt laddade. Om man vill separera mycket små DNA-fragment använder man en polyakrylamidgel.
Varför gelelektrofores?
Gel-elektrofores är en vanlig metod för att separera biomolekyler som proteiner och DNA-fragment. Metoden används främst inom molekylärbiologisk forskning och medicinsk diagnostik. Den kräver dock en hel del manuellt arbete och en analys kan ta flera timmar att utföra.
Vad gör SDS?
SDS används i SDS-PAGE för att denaturera proteiner till enskilda polypeptider genom att SDS förhindrar nästan alla icke-kovalenta interaktioner i proteinerna. För att hindra bildningen av disulfidbindningar tillsätts även exempelvis merkaptoetanol.
Hur fungerar PCR teknik?
Med PCR-metoden spårar man ett smittämnes arvsmassa (deoxiribonukleinsyra, DNA eller ribonukleinsyra, RNA) genom att korta startsekvenser av DNA (på engelska ”primers”), blandas med provet tillsammans med bland annat enzymet DNA-polymeras och nukleotider (DNA-byggstenar).