Innehållsförteckning
Hur gör man cDNA?
cDNA.
- Man isolerar mRNA på ungefär samma sätt som man isolerar DNA.
- Man sätter till ett sökfragment om består av T (tymin).
- Sedan tillsätts reverse transkriptas.
- Hybriden blir en kombination av RNA och DNA, en så kallad RNA-DNA-hybrid.
- Därefter ser man till att degradera mRNA-strängen, alltså att bryta ner den.
Vad menas med RNA interferens?
RNA-interferens (RNAi) är ett fenomen i levande celler, där dubbelsträngat RNA kan tysta en gen så att den inte uttrycks. Detta kan ses som ett slags immunförsvar för genomet. 2006 års nobelpris i medicin delades ut till Andrew Fire och Craig Mello för upptäckten av fenomenet och dess mekanismer.
Hur gör man för att isolera en gen?
En extra bonus: Om man klonar eukaryot DNA, måste man se till att intronerna klipps bort när man väl uttrycker sin gen.
- Det kan man göra genom att ha sitt DNA i en eukaryot värdcell.
- Men i mRNA finns det inga exoner – därför kan man ha sitt DNA i en prokaryot värdcell (bakterie).
Vad innebär det att man har isolerat en gen?
Bitar av isolerade gener kan användas som en gensond. Gensonderna kan sedan användas för att samma gen finns i ett cellprov. Isolerade gener kan också klippas ut och föras in i nya organismer.
Hur klipper man ut en gen?
För att klippa DNA-molekyler i mindre bitar använder man en grupp proteiner som kallas restriktionsenzymer. De fun- gerar i naturen som bakteriernas försvar mot virus: de känner igen och klipper av DNA-molekyler vid vissa kombinationer av DNA-bokstäver, som bakterierna själva inte har.
Hur isolerar man en gen?
Med hjälp av omvänt transkriptas gör man sig DNA. Eftersom detta DNA är komplementärt till RNA:t man till en början isolerade från sina celler, kallas det komplementärt DNA eller cDNA (från engelskans complementary).
Vad som avses med exoner och introner?
En gen består av en till hundratals exoner som utgör den funktionella koden för hur olika protein (eller RNA) ska tillverkas. Exonerna skiljs åt av introner som är icke-kodande bitar av DNA. Under splitsningen klipps intronerna bort och exonerna sätts samman till en sammanhängande enhet, ett så kallat transkript.